Левомицетин (Laevomycetinum): описание, рецепт, инструкция
Laevomycetinum
Аналоги (дженерики, синонимы)
Хлорамфеникол, Хлороиид, Альфицетин, Берлицетин, Биофеникол, Хемицетин, Хлорнитромицин, Хлороциклина, Хлоромицетин, Хлоронитрин, Хлороптик, Клобинекол, Детреомицина, Галомицетин, Лейкомииин, Параксин, Синтомицетин, ТифомицетинТифомииинДействующее вещество
Хлорамфеникол (Chloramphenicol)
Фармакологическая группа
Амфениколы
Рецепт
Международный:
Rp.: Tab. Laevomycetini 0,25 N. 20.
D. S. По 1 таблетке 4 раза в день в течение 5 дней.
Rp.: Sol. Laevomycetini 0,25% 10 ml.
D. S. По 1 капле 3 раза в день в оба глаза в течение 1 нед.
Rp.: Laevomycetini 0,25.
D.td N. 20 in caps.
S. По 1 капсуле 4 раза в день в течение 5 дней.
Россия:
Rp.: Tab. Chloramphenicoli 0,5 № 20.
D. S. По 1 таблетке 4 раза в день
Rp.: Sol. Chloramphenicoli 0,25% — 10 ml.
D. S. По 1 капле 3 раза в день в оба глаза
Рецептурный бланк 107-1/у
Фармакологическое действие
Левомицетин – противомикробный препарат эффективный в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Обладает выраженным бактериостатическим действием, в высоких концентрациях в отношении некоторых штаммов проявляет бактерицидное действие. Механизм действия основан на способности связываться с 50S субъединицей бактериальных рибосом и ингибировать синтез белков в клетках бактерий.
К действию Левомицетина чувствительны штаммы Escherichia coli, Shigella spp. (в том числе Shigella dysenteria), Salmonella spp., Streptococcus spp. (в том числе Streptococcus pneumoniae), Neisseria spp., Proteus spp., Ricketsia spp., Treponema spp. и Chlamydia trachomatis. Кроме того, препарат эффективен при заболеваниях вызванных некоторыми штаммами Pseudomonas aeruginosa.
Действие препарата не распространяется на грибы, простейшие и штаммы Mycobacterium tuberculosis.
Устойчивость микроорганизмов к левомицетину развивается медленно.
После перорального применения препарат быстро абсорбируется в желудочно-кишечном тракте. Биодоступность при пероральном применении достигает 80%. Пик плазменных концентраций отмечается спустя 1-3 часа после приема. После перорального применения терапевтически значимые концентрации сохраняются в плазме крови в течение 4-6 часов, после парентерального введения – в течение 8-12 часов. Степень связи хлорфенирамина с белками плазмы составляет около 50%. Левомицетин проникает через гематоплацентарный и гематоэнцефалический барьер, выделяется с грудным молоком. Метаболизируется в печени, выводится преимущественно почками, некоторая часть препарата выводится кишечником. Период полувыведения достигает 1,5-3,5 часов.
Способ применения
Для взрослых:
— Таблетки:
Препарат предназначен для перорального применения. Таблетку левомицетина следует глотать целиком, не разжевывая и не измельчая, запивая достаточным количеством жидкости. Рекомендуется принимать за 30 минут до приема пищи. Пациентам, у которых прием данного лекарственного средства вызывает развитие тошноты, таблетку следует принимать спустя 60 минут после приема пищи. Препарат следует принимать через равные промежутки времени. Длительность курса лечения и дозы определяет лечащий врач индивидуально для каждого пациента.
Взрослым обычно назначают по 250-500 мг препарата 3-4 раза в день.
Максимальная суточная доза для взрослых — 4000 мг.
Длительность курса лечения обычно составляет 1-1,5 недели.
При хорошей переносимости препарата и отсутствии побочных эффектов со стороны системы кроветворения длительность курса лечения может быть увеличена до 2 недель.
— Порошок для приготовления раствора для инъекций:
Раствор предназначен для парентерального (внутримышечного и внутривенного) введения. Детям назначают только внутримышечное введение. Для приготовления раствора для внутримышечной инъекции содержимое флакона растворяют в 2-3 мл воды для инъекций или 2-3 мл 0,25% или 0,5% раствора новокаина. Раствор следует вводить глубоко в наружный верхний квадрант ягодичной мышцы. Для приготовления раствора для внутривенного струйного введения содержимое флакона растворяют в 10 мл воды для инъекций или в 10 мл 5% или 40% раствора глюкозы. Длительность внутривенной струйной инъекции должна составлять не менее 3 минут. Пациентам, страдающим сахарным диабетом для внутривенного струйного введения содержимое флакона растворяют в 10 мл воды для инъекций или 10 мл 0,9% раствора натрия хлорида.
Взрослым обычно назначают 500-1000 мг препарата 2-3 раза в день.
Взрослым при тяжелых инфекционных заболеваниях обычно назначают по 1000-2000 мг препарата 2-3 раза в день.
Максимальная суточная доза препарата составляет 4000 мг.
Детям и подросткам в возрасте от 3 до 16 лет обычно назначают препарат в дозе 25 мг/кг массы тела 2 раза в день.
В офтальмологической практике готовый раствор можно применять для парабульбарных инъекций или инстилляций. В качестве растворителя допускается применения воды для инъекций и 0,9% раствора натрия хлорида.
В виде инстилляций закапывают в конъюнктивальный мешок по 1-2 капли 5% раствора препарата 3-5 раз в день.
Длительность курса лечения 5-15 дней.
При парентеральном и пероральном применении Левомицетина следует регулярно контролировать картину крови, а также функцию печени и почек.
Для детей:
Детям в возрасте от 3 до 8 лет обычно назначают по 125 мг препарата 3-4 раза в день.
Показания
Применяют для терапии пациентов с инфекционными заболеваниями, вызванными микроорганизмами чувствительными к действию левомицетина. Препарат назначают в случае неэффективности или невозможности применения других противомикробных средств при таких заболеваниях:
Инфекционные заболевания дыхательных путей: пневмония, абсцесс легкого.
Инфекционные заболевания органов брюшной полости: брюшной тиф, паратиф, шигельоз, сальмонельоз, перитонит.
Кроме того, препарат назначают пациентам с менингитом, хламидиозом, трахомой и туляремией.
Противопоказания
Повышенная индивидуальная чувствительность к компонентам препарата, а также тиамфениколу и азидамфениколу.
Левомицетин противопоказан пациентам, страдающим нарушением функции кроветворения, тяжелыми заболеваниями печени и/или почек и дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы.
Препарат не назначают пациентам с грибковыми заболеваниями кожи, псориазом, экземой, порфирией, а также острыми респираторными заболеваниями, в том числе ангиной.
Препарат не применяют для предупреждения инфекционных осложнений при оперативных вмешательствах.
Левомицетин не следует назначать для терапии женщин в период беременности и грудного вскармливания, а также для лечения детей в возрасте младше 3 лет.
Пациенты, имеющие склонность к развитию аллергических реакций должны принимать препарат под тщательным наблюдением лечащего врача.
Следует соблюдать осторожность при назначении Левомицетина пациентам, работа которых связана с управлением потенциально опасными механизмами и вождением автомобиля.
Побочные действия
- Со стороны желудочно-кишечного тракта и печени: тошнота, рвота, нарушение пищеварения, нарушение стула, стоматит, глоссит, нарушение микрофлоры кишечника, энтероколит.
- Со стороны сердечно-сосудистой системы и системы кроветворения: гранулоцитопения, панцитопения, эритроцитопения, анемия, в том числе апластическая, агранулоцитоз, тромбоцитопения, лейкопения, изменение артериального давления, коллапс.
- Со стороны центральной и периферической нервной системы: головная боль, головокружение, эмоциональная лабильность, энцефалопатия, спутанность сознания, повышенная утомляемость, галлюцинации, нарушения зрения, слуха и вкусовых ощущений.
- Аллергические реакции: кожная сыпь, зуд, крапивница, дерматозы, отек Квинке.
Другие: кардиоваскулярный коллапс, повышение температуры тела, суперинфекция, дерматит, реакция Яриша-Герксгеймера.
Форма выпуска
Таблетки по 10 штук в контурной упаковке
Порошок для приготовления раствора для инъекций по 0,5 или 1г во флаконе.
Левомицетин инструкция по применению, цена в аптеках Украины, аналоги, состав, показания | Laevomycetin
Состав
действующее вещество: 1 мл препарата содержит 2,5 мг хлорамфеникола;
вспомогательные вещества: кислота борная, вода для инъекций.
Лекарственная форма
Капли глазные 0,25%.
Основные физико-химические свойства: прозрачная бесцветная жидкость.
Фармакотерапевтическая группа
Средства, применяемые в офтальмологии. Антибиотики. Хлорамфеникол. Код АТХ S01A A01.
Фармакологические свойства
Фармакодинамика.
Левомицетин является антибиотиком широкого спектра действия: эффективен в отношении многих грамположительных и грамотрицательных бактерий, риккетсий, спирохет, возбудителей трахомы, пситтакоза, венерической лимфогранулемы; действует на штаммы бактерий, устойчивых к пенициллину, стрептомицину, сульфаниламидам. Слабоактивен в отношении кислотоустойчивых бактерий, синегнойной палочки, простейших и клостридий.
Устойчивость микроорганизмов к левомицетину развивается относительно медленно.
В обычных дозах действует бактериостатически. Механизм антимикробного действия левомицетина связан с нарушением синтеза белков микроорганизмов.
Фармакокинетика.
Препарат хорошо проникает в ткани и жидкости организма; терапевтические концентрации левомицетина при назначении его местно в глазных каплях образуются в стекловидном теле, роговице, радужной оболочке, водянистой влаге глаза; в хрусталик препарат не проникает.
Клинические характеристики
Показания.
Конъюнктивиты, кератиты, блефариты, вызванные чувствительными к препарату микроорганизмами.
Противопоказания.
Повышенная индивидуальная чувствительность к каким-либо компонентам препарата. Заболевания кожи (псориаз, экзема, грибковые поражения).
Взаимодействие с другими лекарственными средствами и другие виды взаимодействий.
Взаимодействие при местном применении глазных капель с другими препаратами не установлено.
В случае сопутствующего применения других местных офтальмологических препаратов придерживаться интервала не менее 15 минут между их применением. Глазные мази следует применять последними.
Особенности применения.
Не допускается бесконтрольное назначение левомицетина, особенно в педиатрической практике.
Применение в период беременности или кормления грудью.
Препарат противопоказан в период беременности. На период лечения препаратом следует прекратить кормление грудью.
Способность влиять на скорость реакции при управлении автотранспортом или другими механизмами.
В течение 1 часа после приема препарата (пока зрение прояснится) следует воздержаться от управления автотранспортом или работы с другими механизмами.
Способ применения и дозы.
Закапывать в конъюнктивальный мешок пипеткой по 1 капле препарата 3 раза в сутки в оба глаза. Курс лечения обычно составляет 5–15 дней (зависит от характера и выраженности заболевания, достигнутого терапевтического эффекта).
Дети.
Детям до 4 недель назначать только по жизненным показаниям.
Передозировка.
Увеличенные дозы левомицетина могут привести к временному снижению остроты зрения. При таком явлении следует промыть глаза проточной водой.
Побочные реакции
Со стороны иммунной системы, кожи и подкожной клетчатки: аллергические реакции, включая сыпь, ангионевротический отек, крапивницу, зуд, гиперемию кожи.
Со стороны нервной системы: возможна головная боль, головокружение..
Нарушения в месте введения: возможны местные реакции, включая отек век, зуд, раздражение глаз и слезотечение.
Срок годности.
2 года.
После раскрытия флакона — 15 суток.
Не применять после истечения срока годности, указанного на упаковке.
Условия хранения
Хранить в оригинальной упаковке для защиты от воздействия света при температуре не выше 25 оС. Хранить в недоступном для детей месте.
Упаковка
По 10 мл 0,25% раствора во флаконах пластиковых. По 1 флакону в картонной пачке.
Категория отпуска.
По рецепту.
Производитель
ООО «ФЗ «БИОФАРМА», Украина.
Местонахождение производителя и его адрес места осуществления деятельности
Украина, 09100, Киевская область, г. Белая Церковь, ул. Киевская, 37.
Показания к применению
Применяют при ожогах, порезах, трещинах кожи, отитах и заболеваниях, осложненных гнойной инфекцией.
Противопоказания
Повышенная чувствительность к компонентам препарата, дефицит фермента глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, острая интермиттирующая порфирия, кожные заболевания (псориаз, экзема, грибковые поражения), период беременности и грудного вскармливания.
Способ применения
Применяют взрослым и детям старше 1 года. Смазывают пораженные участки кожи (можно применять под окклюзионную повязку). Для лечения ран и ожогов препарат наносят на пораженные участки кожи 4-5 раз в сутки.
При гнойных отитах препарат закапывают в наружный слуховой проход (по 2-3 капли). Процедуру повторяют 1 — 2 раза в день, а при значительных выделениях, которые смывают нанесенный раствор, — до 3 — 4 раз в день.
Длительность применения зависит от характера патологического процесса, его выраженности и достигнутого эффекта.
Условия хранения и сроки годности
Хранить при температуре не выше + 25 градусов, в оригинальной упаковке, в защищенном от света и недоступном для детей месте.
Категория отпуска
Без рецепта.
инструкция по применению, аналоги, состав, показания
В период лечения хлорамфениколом недопустим прием алкоголя: при одновременном приеме алкоголя возможно развитие дисульфирамовой реакции (гиперемия кожных покровов, тахикардия, тошнота, рвота, рефлекторный кашель, судороги).
Тяжелые осложнения со стороны кроветворной системы связаны с применением больших доз хлорамфеникола (более 4000 мг/сут) длительное время.
Противопоказано применение лекарственного средства в период активной иммунизации.
Clostridium difficile-ассоциированная диарея (CDAD), как сообщается, возникает при использовании практически всех антибактериальных- средств, в том числе хлорамфеникола, и может варьировать по тяжести от легкой диареи до фатального колита. Лечение антибактериальными средствами изменяет нормальную микрофлору толстой кишки, приводит к чрезмерному росту С. difficile.
С. difficile продуцирует токсины А и В, которые способствуют развитию диареи. Гипертоксинпродуцирующие штаммы С. difficile являются пришлой повышенной заболеваемости и смертности, так как эти инфекции могут быть рефрактерными к антибактериальной терапии, и может потребоваться колэктомия, CDAD должна быть заподозрена у всех пациентов с диареей, возникшей после применения антибиотиков.
Необходим тщательный анамнез, так как диарея может возникать л течение 2 месяцев после применения антибактериальных лекарственных средств.
Если CDAD является подозреваемой или подтвержденной, продолжение применения антибиотиков, ненаправленных против С. difficile, должно быть прекращено. Необходимо применять соответствующие жидкости и электролиты, белковые добавки, антибиотики против С. difficile, должна быть проведена хирургическая оценка. Следует избегать повторных курсов лечения хлорамфениколом. Лечение не должно проводиться до начала лечения и более чем это действительно необходимо.
Чрезмерно высокий уровень препарата в крови может наблюдаться у пациентов с нарушениями функции печени или почек. У таких пациентов применение препарата противопоказано.
Использование хлорамфеникола, как и других антибиотиков, может привести к чрезмерному росту нечувствительных микроорганизмов, включая грибки. Если инфекции, вызванные нечувствительными микроорганизмами, появляются во время терапии препаратом, необходимо применять соответствующие меры.
Применение хлорамфеникола может вызвать тяжелые нарушения со стороны крови (апластическая анемия, гипоплазия костного мозга, тромбоцитопения, гранулоцитопения). Выделяют два типа депрессии костного мозга, связанные с использованием хлорамфеникола. Обычно наблюдается легкая депрессия костного мозга, дозозависимая и обратимая, которую можно выявить по ранним изменениям в анализах крови. Очень редко встречается внезапное фатальное поражение костного мозга гипоплазия без предшествующих симптомов. Базовые исследования крови должны проводиться до начала лечения и примерно каждые два дня во время терапии препаратом. Прием хлорамфеникола следует прекратить при появлении ретикулоцитопении, лейкопении, тромбоцитопении, анемии или любых других лабораторных изменений крови. Тем не менее, следует отметить, что такие исследования не исключают возможного последующего появления необратимых угнетений костного мозга. Параллельное применение вместе с хлорамфениколом других лекарственных средств, угнетающих функцию красного костного мозга, противопоказано.
При использовании лекарственного средства у больных сахарным диабетом в тестах на наличие глюкозы в моче возможны ложноположительные результаты.
Стоматология. Применение препарата приводит к увеличению частоты микробных инфекций полости рта, замедлению процессов заживления и кровоточивости десен, что может быть проявлением миелотоксичности. Стоматологические вмешательства следует, по возможности, завершить до начала терапии.
Предшествующее лечение цитостатиками или лучевая терапия. Возможно накопление хлорамфеникола и токсические реакции в виде угнетения костного мозга, нарушения функции печени.
Гериатрическое применение. Особенности применения у пожилых лиц не были достаточно изучены в связи с небольшим количеством человек в возрасте 65 лет и старше, принимавших участие в клинических испытаниях. Есть клинические исследования, показывающие отсутствие различий в терапевтическом ответе на лечение препаратом между пожилыми и молодыми пациентами. Однако, выбор дозы для пожилых пациентов должен быть осторожным, как правило, начиная с нижней границы диапазона дозирования. Лекарственное средство существенно экскретируется через почки и риск развития токсических реакций может быть выше у пациентов с нарушенной функцией почек. Так как у пациентов пожилого возраста более вероятно снижение функции почек, следует проявлять осторожность в выборе дозы и необходимо контролировать функцию почек.
Чем нас лечат: Левомицетин — Индикатор
Не раз его проверяли как средство для дезинфекции в гинекологии. При естественных родах (без кесарева сечения) прием антибиотиков внутрь может снизить риск эндометрита, но эти данные еще ждут своего подтверждения, а вот польза хлорамфеникола при родах с эпизиотомией вообще под большим вопросом – как и при аборте, осложненном инфекцией (эндометритом или параметритом).
Делая операции при катаракте, можно несколько понизить вероятность инфицирования, если совмещать капли с хлорамфениколом и инъекции пенициллина или цефуроксима.
Одной из сильных сторон препарата стала его борьба с менингококками: по данным обзора, где просуммированы исследования на 1496 пациентах, он оказался ничуть не хуже антибиотиков из группы цефалоспоринов. А вот добавление ампициллина к хлорамфениколу не приносило никаких улучшений результата. Также нет доказательств того, что при подозрении на менингит лучше начать пить антибиотики, а «потом разберемся» (это касается антибиотиков вообще, а не только хлорамфеникола). Однако при лечении пневмонии у детей и подростков пенициллин или ампициллин в комбинации с гентамицином помогают лучше, чем хлорамфеникол, что удалось доказать, проанализировав исследование с участием более 14 тысяч пациентов. При атипичной пневмонии у взрослых препарат, скорее всего, не поможет.
Цуцугамуши (японская речная лихорадка, вызываемая риккетсиями) тоже может быть побеждена хлорамфениколом, но его действие лишь косвенно сравнивали с другими антибиотиками, так что он будет явно не первым вариантом лечения.
По трофическим язвам на ногах Кохрейновскому сотрудничеству тоже сказать нечего: данных слишком мало (и очень жаль, так как это очень неприятная и долго беспокоящая пациентов проблема, которая трудно лечится).
Indicator.Ru рекомендует: применяйте не первым выбором
70 лет использования и исследований – большой срок, предоставивший ученым много информации о препарате. Все эти данные сделали Левомицетин препаратом второго выбора при многих инфекционных болезнях, вызванных бактериями. Всемирная организация здравоохранения включила его в свой список самых эффективных (в том числе и с экономической точки зрения) и безопасных препаратов, хотя и рекомендует принимать его с осторожностью. В этом списке значатся пальмитат в виде жидкости для приема внутрь, суспензия для инъекций (только для лечения менингита у детей старше двух лет, печень которых способна переработать препарат), а также пудра для инъекций и капсулы по 250 мг (оба варианта – в форме сукцината натрия).
Но тот же самый срок для большинства антибиотиков оказался критичным: быстрая эволюция позволяет микроорганизмам развить устойчивость к лекарствам. Левомицетин не смог избежать общей участи, и бактерии постепенно находят способ увернуться от удара по своим рибосомам, изменяя их структуру, разрушая хлорамфеникол специальным ферментом или переставая пропускать антибиотик сквозь мембрану. Поэтому его последними рубежами обороны стали менингит (в случае, если первый вариант лечения не помог или недоступен), тифоидная и другие лихорадки, включая экзотические (но тоже вторым выбором), чума и холера. Но основная проблема даже не в этом: препарат обладает достаточно высокой токсичностью, поэтому редко (при приеме внутрь это будет 1 на 20 000–40 000 случаев), но метко снижает число клеток крови, подавляя работу костного мозга, а иногда и повышает риск лейкемии. Поэтому, если доступны более безопасные антибиотики, стоит предпочесть их, а Левомицетин отправить на антисептические нужды.
| № п/п | МНН | Торговое название |
| 1 | Метилпреднизолонаацепонат | Адвантан мазь |
| 2 | Умифеновир | Арбидол |
| 3 | Депротеинизированныйгемодериват из крови телят | Актовегин |
| 4 | Депротеинизированныйгемодериват из крови телят | Актовегин |
| 5 | Амброксол | Амброксол сироп |
| 6 | Амоксициллин | Амоксиклав |
| 7 | Анаферон | Анаферон детский |
| 8 | Ампициллин+ сульбактам | Амписид |
| 9 | Амоксициллин+клавулановая кислота | Аугментин |
| 10 | Gentiana + Aconitum + Bryonia + Ferrumphosphoricum + Acidumsarcolacticum | Афлубин |
| 11 | Ацикловир | Ацикловир мазь |
| 12 | Ипратропиябромид + фенотерол | Беродуал |
| 13 | Бифидобактериибифидум | Бифидум-бактерин |
| 14 | Бромгексин | Бромгексин сироп |
| 15 | Лизат бактерий (Escherichiacoli) | Бронхо-ваксом |
| 16 | Будесонид | Буденит |
| 17 | Винпоцетин | Винпоцетин |
| 18 | Ретинол | Вит.А (Ретинола пальмитат) |
| 19 | Интерферон альфа — 2b | Виферон суппозитории |
| 20 | Интерферон альфа — 2 | Гриппферон |
| 21 | Цетиризин | Зиртек |
| 22 | Ибупрофен | Ибупрофен |
| 23 | Ипратропия бромид + | Ипратерол- |
| Фенотерол | натив | |
| 24 | Лизаты бактерий | ИРС 19 спрей |
| 25 | Калия йодид | Калия йодид |
| 26 | Карбамазепин | Карбалепсин |
| 27 | Лоратадин | Кларисенс сироп |
| 28 | Полипептиды коры головного мозга скота | Кортексин |
| 29 | Панкреатин | Креон |
| 30 | Лактобактерии ацидофильные | Лактобактерин |
| 31 | Лактулоза + лигнин | Лактофильтрум |
| 32 | Хлорамфеникол | Левомицетин гл.капли |
| 33 | Лебенин | Линекс |
| 34 | Магния лактатдигидрат + магния пидолят + пиридоксина гидрохлорид | Магне В6 |
| 35 | Железа III гидроксид полимальтозат | Мальтофер сироп |
| 36 | Мирамистин | Мирамистин |
| 37 | Домперидон | Мотилиум |
| 38 | Оксиметазолин | Називин |
| 39 | Нафазолин | Нафтизин |
| 40 | Смектитдиоктаэдрический | Неосмектин |
| 41 | Нимесулид | Нимика |
| 42 | Лактулоза | Нормазе сироп |
| 43 | Диоксотетрагидрокситетрагидронафталин | Оксалин мазь |
| 44 | Лидокаин + феназон | Отирелакс |
| 45 | Гопантеновая кислота | Пантогам |
| 46 | Цефиксим | Панцеф |
| 47 | Парацетамол | Парацетамол |
| 48 | Парацетамол | Парацетамол суппозитории |
| 49 | Пирантел | Пирантел суспензия |
| 50 | Лактулоза | Порталак сироп |
| 51 | Будесонид | Пульмикорт |
| 52 | Будесонид | Пульмикорт |
| 53 | Поливитамины | Ревит |
| 54 | Инозин | Рибоксин |
| 55 | Фенспирид | Сиресп |
| 56 | Сульфацетамид | Сульфацил натрия |
| 57 | Азитромицин | Сумамед |
| 58 | Азитромицин | Сумамед |
| 59 | Хлоропирамин | Супрастин |
| 60 | Таурин | Таурин |
| 61 | Диметинден | Фенистил |
| 62 | Диметинден | Фенистил гель |
| 63 | Железа III гидроксид полимальтозат | Феррум Лек |
| сироп | ||
| 64 | Амоксициллин | Флемоксин Солютаб |
| 65 | Амоксифиллин | Флемоксин Солютаб |
| 66 | Флуконазол | Флуконазол |
| 67 | Флуконазол | Флуконазол |
| 68 | Фолиевая кислота | Фолиевая кислота |
| 69 | Фосфолипиды | Фосфонциале |
| 70 | Фуразидин | Фурагин |
| 71 | Артишок листьев экстракт | Хофитол |
| 72 | Цефазолин | Цефазолин |
| 73 | Парацетамол | Цефекон Д суппозитории |
| 74 | Парацетамол | Цефекон Д суппозитории |
| 75 | Цинаризин | Цинаризин |
| 76 | Левокарнитин | Элькар |
| 77 | Нифуроксазид | Энтерофурил |
| 78 | Амоксициллин + Клавулановая кислота | Экоклав |
| 79 | Амоксициллин + Клавулановая кислота | Экоклав |
| 80 | Урсодезоксихолевая кислота | Эксхол |
| 81 | Урсодезоксихолевая кислота | Урсолив |
| 82 | Азитромицин | Экомедсуспенз. |
| 83 | Полиметилсилоксана полигидрат | Энтеросгель |
| 84 | Энтерол | Энтерол |
| 85 | Симетикон | Эспумизан L |
| По списку детей : | ||
| 86 | Вальпроевая кислота | ВальпаринХР |
| 87 | Вальпроевая кислота | ВальпаринХР |
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||
|
ЛЕВОМИЦЕТИН-DF — DOSFARM | Казахстанский производитель лекарственных препаратов
Хлорамфеникол может системно всасываться со слизистых оболочек, вызывая системные эффекты. Описаны возможность возникновения гипоплазии костного мозга, включая апластическую анемию с летальным исходом после местного применения хлорамфеникола. Такие случаи возникают редко и здесь необходимо проводить оценку риска и возможности применения хлорамфеникола. Как при краткосрочном, так и при продолжительном применении глазных капель с хлорамфениколом может быть целесообразным наблюдение за картиной крови до начала терапии и через соответствующие промежутки времени, для возможного обнаружения отклонений в кроветворной системе организма. При тяжелых инфекциях, местное применение хлорамфеникола дополняется соответствующей системной терапией.
Длительное использование глазных капель с хлорамфениколом следует избегать, так как это может привести к сенсибилизации и появлению резистентных микроорганизмов. Если проявляется какой-то новый инфекционный фактор, лечение этим антибиотиком должно быть прекращено и должны быть приняты соответствующие меры. Хлорамфеникол должен быть переведен в разряд резервных препаратов для лечения чувствительных микроорганизмов.
Хлорамфеникол не достаточно активен в отношении синегнойной палочки и энтеробактерии Serratia marcescens.
Не следует применять препарат более 5 дней без консультации с лечащим врачом.
Врачебная консультация требуется, если не наблюдается улучшения в состоянии здоровья после 2-х дней применения препарата или при ухудшении симптомов независимо от сроков применения.
Пациенту следует обратиться к врачу, если обнаруживаются следующие симптомы:
- нарушение зрения;
- сильная боль в глазах;
- светобоязнь;
- воспаление глаз, связанные с сыпью на коже головы или лица;
- помутнение в глазах;
- если зрачок выглядит необычно;
- подозрение на инородное тело в глазу.
Перед применением глазных капель пациенту также требуется консультация врача в случаях:
- при недавно перенесенном конъюнктивите;
- глаукоме;
- синдроме «сухого глаза»;
- перенесенных хирургических вмешательствах или операциях лазером на глаза в течение последних 6-ти месяцев;
- травмы глаз любого происхождения;
- текущего применения других глазных капель или глазных мазей;
- использование контактных линз любого типа, во избежание повреждения объектива.
Не следует назначать препарат с профилактической целью. Не допускается необоснованное назначение препарата и применение его при легких формах инфекционных заболеваний, особенно в детской практике.
В процессе лечения необходим систематический контроль картины периферической крови.
С осторожностью назначают пациентам, получавшим ранее лечение цитостатическими препаратами или лучевую терапию.
Во избежание загрязнения раствора, флакон следует хранить плотно закрытым и избегать соприкосновения кончика пипетки с какой-либо поверхностью.
Особенности влияния лекарственного средства на способность управлять транспортным средством или потенциально опасными механизмами
В течение 1 часа после приема препарата (пока зрение прояснится) следует воздержаться от управления автотранспортом или работы с другими механизмами.
Addgene: Заливка планшетов с агаром LB
Введение
Плазмиды могут нести один или несколько генов устойчивости к антибиотикам, которые придают устойчивость к определенному антибиотику бактериям, несущим их. Присутствие гена устойчивости к антибиотикам в плазмиде позволяет исследователям легко изолировать бактерии, содержащие эту плазмиду, от бактерий, которые не содержат ее, путем искусственного отбора (т. Е. Выращивания бактерий в присутствии антибиотика).
Бульон Лурии (LB) — это богатая питательными веществами среда, обычно используемая для культивирования бактерий в лаборатории.Добавление агара к LB приводит к образованию геля, на котором могут расти бактерии, поскольку они не могут переваривать агар, но могут собирать питательные вещества из LB внутри. Добавление антибиотика к этому гелю позволяет отбирать только те бактерии, которые обладают устойчивостью к этому антибиотику, обычно обеспечиваемой плазмидой, несущей ген устойчивости к антибиотикам. Следующий протокол позволит вам приготовить собственные чашки с LB / агаром с интересующим вас антибиотиком.
Последняя загрузка: 14 сентября 2016
Процедура
Отмерьте 37 г предварительно смешанного порошка LB-агара на литр расплавленного агара, который вы хотите приготовить.Точная масса, которую вы отмеряете, будет зависеть от количества тарелок, которые вы хотите налить.
Например: Поскольку мы хотим сделать 20 планшетов, а наши планшеты вмещают максимум 10 мл, нам понадобится всего 200 мл среды.
Важно отметить, что на самом деле мы сделаем чуть больше 200 мл (~ 220 мл) на тот случай, если что-нибудь разольем или возникнут небольшие ошибки в измерениях.Вы также должны всегда делать немного больше гелеобразной смеси, чем вам нужно.
Итак, для 220 мл LB-агара нам понадобится:
(37 г предварительно смешанного порошка LB-агара / л) x (0,220 л) = 8,14 г предварительно смешанного порошка LB-агара.
- Перелейте отмеренный порошок LB-агара в бутыль подходящего размера для автоклавирования. Мы делаем 400 мл агара в бутылях на 1 л и 200 мл агара в бутылях на 500 мл.Дополнительный пустой объем необходим для предотвращения выкипания расплавленного агара в автоклаве.
- Перелейте стерильную воду (в нашем случае 220 мл) в ту же бутылку и перемешайте, чтобы образовался коллоид среды / агара.
- Закройте отверстие флакона крышкой или алюминиевой фольгой (но не делайте герметичного закрытия!) И заклейте флакон автоклавной лентой. Лента автоклава потемнеет во время процесса автоклавирования, если ваш образец провел не менее 10 минут при 121 ℃.Наклейте этикетку на бутылку с помощью лабораторной ленты своими инициалами, датой и содержимым бутылки. Это устранит любую путаницу, если вы забудете бутылку в автоклаве.
- Поместите гелевую смесь в автоклав и запустите в режиме, при котором температура пробы должна быть не менее 121 ℃ и ниже 20 фунтов на квадратный дюйм в течение не менее 30 минут. Высокое давление предотвратит выкипание гелевой смеси при высокой температуре.
* Pro-Tip * Несмотря на то, что наша рекомендуемая температура должна убивать большинство потенциальных загрязнителей, некоторые виды спор устойчиво выживают даже в суровых условиях автоклава.Обязательно ознакомьтесь с литературой о подходящей методике стерилизации, если вы работаете с какими-либо странными и чудесными организмами.
- Пока ваши образцы стерилизуются в автоклаве, вам следует подготовить станцию для разливки планшетов:
- Найдите пустую секцию лабораторного стола с работающим пламенем.
- Обрызгайте скамейку 70% раствором этанола и протрите бумажным полотенцем.
- Подсчитайте необходимое количество планшетов и сложите их на лабораторном столе.
- Пометьте чашки с датой и средой, которую они будут содержать, включая идентификацию антибиотика.
* Pro-Tip * Мы серийно маркируем наши чашки цветным маркером — определенные цвета соответствуют определенным антибиотикам.
- Разместите пламя сбоку от того места, где вы будете разливать тарелки — не забудьте оставить место для бутылки с расплавленной гелевой смесью, стойки для пробирок, содержащей соответствующие антибиотики, и секции для активного разлива.
- Приготовьте антибиотики. Перед добавлением антибиотика в расплавленную гелевую смесь необходимо создать 1000-кратный маточный раствор.
- Приготовьте водяную баню при 60 ℃ с водой, достаточной для погружения ~ 75% бутылки, содержащей вашу расплавленную гелевую смесь.
* Pro-Tip * Вы охладите расплавленный агар на водяной бане перед добавлением антибиотика. 60 ℃ — хорошая температура, потому что расплавленный агар остается жидким при этой температуре, но большинство антибиотиков не разрушаются при этой температуре. Обратитесь к производителю антибиотика, чтобы убедиться, что это так в вашем случае.
- Извлеките смесь расплавленного агара из автоклава.
* Pro-Tip * По завершении цикла автоклава мы рекомендуем приоткрыть дверцу автоклава чуть-чуть и оставить ее открытой на ~ 10 мин. Это позволит пару выйти из автоклава и слегка охладит гелевую смесь. Тем не менее, вы всегда должны использовать теплоизоляционные перчатки при извлечении чего-либо из автоклава.
- Частично погрузите расплавленную гелевую смесь в водяную баню с температурой 60 ℃.
- Зажгите пламя на станции разливки планшетов и разведите антибиотик в расплавленной гелевой смеси ~ 60 ℃, используя стерильную технику.
- Вращайте бутыль с агаром, чтобы обеспечить равномерное распределение антибиотика по всему агару.
- Открывайте по одной тарелке рядом с пламенем и начинайте заливку. Отмерьте желаемое количество агара трубкой для первой чашки, чтобы получить хорошее представление о том, как этот объем выглядит в вашей конкретной чашке.
- Оставшуюся часть тарелок вылейте прямо из бутылки.
* Pro-Tip * Обязательно покрутите чашки после заливки, чтобы удалить пузырьки и обеспечить равномерное распределение агара по дну чашки. Закройте каждую тарелку крышкой после заливки и складывайте по мере заливки.
* Pro-Tip * Если во время заливки агар частично затвердевает в бутылке, прекратите заливку и заново приготовьте гелевую смесь.Если вы делаете чашки без каких-либо антибиотиков, вы можете в качестве альтернативы снова разжижить агар, снова пропустив его через автоклав или поместив в микроволновую печь (если вы используете микроволновую печь, остерегайтесь перекипания!).
- Оставьте тарелки на скамейке для застывания.
* Pro-Tip * Для застывания пластин при комнатной температуре требуется примерно 30 минут, однако мы оставляем их при комнатной температуре на ночь, чтобы они высохли. После сушки в течение ночи помещаем пластины в полиэтиленовый пакет с абсорбирующим материалом, чтобы уменьшить образование конденсата.Затем планшеты хранят при 4 ℃ до использования.
- После того, как чашки затвердеют и высохнут, вы должны протестировать их, чтобы убедиться, что антибиотики действуют правильно:
- Выньте две пластины.
- На первой чашке выделите штамм, который, как вы знаете, устойчив к антибиотику.
- На второй чашке выделите штамм, не устойчивый к антибиотику.
- Инкубируйте обе чашки в течение ночи при соответствующей температуре роста и проверьте наличие роста. См. Раздел с образцами данных ниже для получения информации о положительных и отрицательных результатах тестирования.
Например: Если вы будете готовить планшеты с конечной концентрацией ампициллина 100 мкг / мл, вам следует приготовить исходный раствор 100 000 мкг / мл (100 мг / мл). Просто отмерьте 100 мг порошка ампициллина, добавьте его в 1 мл воды, растворите встряхиванием и стерилизуйте фильтрованием.
* Pro-Tip * Вы должны оставить расплавленную гелевую смесь на водяной бане как минимум на 5 мин. Не позволяйте воде с водяной бани касаться горлышка или верха бутылки, поскольку эта вода вряд ли будет стерильной. Остывший агар должен быть теплым на ощупь; Как правило, если вы не можете достать расплавленный агар из водяной бани в одних лабораторных перчатках, он вряд ли будет достаточно прохладным, чтобы добавить в него антибиотик.Чтобы убедиться, что ваш агар имеет нужную температуру, мы рекомендуем использовать лазерный термометр.
Пример данных
Во всех приведенных ниже случаях (-) означает, что тестируемый штамм не должен быть устойчивым к антибиотику, (+) означает, что тестируемый штамм должен быть устойчивым к антибиотику.
Положительный результат: растет только устойчивый штамм
Если все было подготовлено правильно, вы должны увидеть рост только устойчивого штамма.Если вы получите этот окончательный результат, ваши планшеты готовы к использованию или хранению при 4 ℃. Вы не должны хранить свои планшеты дольше 1 месяца при любой температуре и всегда должны проверять наличие загрязнения перед использованием.
Отрицательный результат 1: оба штамма растут
Если предположить, что соответствующие штаммы были нанесены штрихами на соответствующие чашки, то, если оба штамма будут расти, возможно, что:
- Антибиотик сломался.
- Вы забыли добавить антибиотик.
- Вы добавили антибиотик в слишком низкой концентрации для выбора.
Отрицательный результат 2: ни один из штаммов не растет
Если ни один из штаммов не растет, возможно, что:
- Вы использовали не тот антибиотик.
- У вас слишком высокая концентрация антибиотика.
- Один или оба ваших штамма больше не жизнеспособны.
- Вы можете проверить эту возможность, нанеся полоски обоих штаммов на чашки без какого-либо антибиотика.
Отрицательный результат 3: растет только неустойчивый штамм
Если растет только неустойчивый штамм, вероятно, вы использовали неправильный антибиотик или перепутали штаммы.
Исходные растворы антибиотиков
(много комментариев от Стэна Малоя)
Антибиотик | Сокращение | Концентрация 1 | Концентрация 1 | Стандартный раствор 2 |
| (Rich Media) | (минимальная среда) | мл / литр | |
На Ампициллин 3 | Усилитель, АП | 50 мкг / мл | 15 мкг / мл 4 | 20 мг / мл 50% этанол |
Хлорамфеникол | Кулачок, см | 20 мкг / мл | 5 мкг / мл | 20 мг / мл EtOH |
Доксициклин | Dox, Dx | 2 мкг / мл | – | 1 мг / мл (500x) |
Гентамицин SO 4 | Gent, Gen, Gn | 10 мкг / мл | – | 2 мг / мл |
Канамицин СО 4 5 | Кан, Кн | 50 мкг / мл | 12.5 мкг / мл | 50 мг / мл (100x) |
Рифампицин | Риф, RF | 100 мкг / мл | – | 20 мг / мл МеОН |
Тетрациклин HCl 6 | Tet, TC | 20 мкг / мл | 10 мкг / мл | 4 мг / мл |
Тиментин | – | 80 мкг / мл | – | 24 мг / мл |
Триметоприм | тм | 200 мкг / мл | – | 15 мг / мл 1% уксусная кислота (75x) |
Спектиномицин | Spec, Spc, Sp | 100 мкг / мл | 50 мкг / мл | 20 мг / мл |
Стрептомицин SO 4 7 | Стреп, ул, См, ул | 200 мкг / мл | 1000 мкг / мл | 40 мг / мл |
Зеоцин | Zeo, Zn, Zc | 50 мкг / мл | – | 100 мг / мл |
1.Твердая форма антибиотиков может быть добавлена непосредственно в стерилизованную среду, которая была охлаждена примерно до 55 ° C. При хранении при 4 ° C чашки с тетрациклином, хлорамфениколом и стрептомицином обычно годны в течение нескольких месяцев, но чашки с канамицином и чашки с ампициллином могут храниться только в течение нескольких недель. Каждый раз при использовании планшетов с антибиотиками следует всегда включать чувствительный и устойчивый контроль.
2. Для жидких сред или для нескольких планшетов можно приготовить основной раствор антибиотиков и хранить его при -20 ° C.Все исходные растворы антибиотиков могут быть приготовлены в стерильной dH 2 O, за исключением указанного. Базовые растворы обычно в 200 раз превышают концентрацию в богатой среде, за исключением неопределенных.
3. Высокий уровень экспрессии β-лактамазы может разрушать ампициллин в среде, окружающей колонии Amp R , что позволяет сателлитным колониям Amp S расти. Сателлитные колонии можно уменьшить, используя 2-кратный ампициллин при отборе плазмид. В качестве альтернативы тиментин предотвращает рост колоний-сателлитов.
4. Анаэробно выращивайте клетки на минимальной среде, содержащей 1 мкг / мл (15 — слишком много).
5. Для отбора гена Kan R на мультикопийной плазмиде используйте LB + 10 мМ Трис HCl pH 7,4 + 250 мкг / мл канамицина SO 4 или неомицина SO 4 . Высокие уровни Kan R не выражаются, если pH среды менее 7,2.
6. Некоторые штаммы устойчивы только к половине этой концентрации тетрациклина.
7. Для планшетов со стрептомицином добавьте 1% питательного бульона к минимальной среде (т.е.е., 1 мл NB / 100 мл среды).
Последнее обновление: понедельник, 14 ноября 2016 г. Эта страница была просмотрена Не удалось выполнить CGI: код ошибки Win32 = 2
раз. Эрик Кофоид eckofoid на ucdavis.edu
Как повысить выход плазмид с помощью антибиотиков
После первоначального возбуждения, связанного с выращиванием и выделением плазмидной ДНК, рутинное приготовление плазмидных мини / midi / maxi preps становится скучным.Вам определенно нужен способ выжать максимальное количество плазмидной ДНК из вашей культуры. Хорошие новости — вы можете увеличить выход плазмид с помощью антибиотиков.
Сохраняйте давление, чтобы повысить выход плазмиды
Помните, что вам необходимо постоянно поддерживать селективное давление в культуре для вашей плазмиды. В противном случае вы начнете терять плазмиду из культуры. Итак, при выращивании культуры добавьте в среду свой антибиотик или другой селективный агент.
Один особый случай — если вы выбираете плазмиду с ампициллином.Плазмида продуцирует фермент, разрушающий ампициллин, бета-лактамазу, который накапливается в среде во время роста. Чтобы удалить бета-лактамазу, избавьтесь от среды закваски, осаждая клетки и повторно суспендируйте их в свежей среде перед масштабированием культуры.
Дополнительные советы по созданию идеального мидипрепа здесь.
Pro-tip: используйте хлорамфеникол
Многие обычно используемые векторы имеют ослабленную точку начала репликации, что позволяет отделить общий синтез белка от репликации плазмиды в E.coli. Добавление хлорамфеникола останавливает синтез белка, но плазмида продолжит репликацию. Это приведет к увеличению количества копий вашего вектора на бактериальный геном.
Плазмиды с расслабленным ориджином, о которых я говорю, имеют ориджин репликации pMB1 или ColE1. Наиболее распространенные векторные магистрали с этим источником (в порядке убывания количества копий на ячейку):
- pUC
- pGEM
- pBR
- pACYC — убедитесь, что ваше производное не устойчиво к хлорамфениколу, так как это сделает добавление антибиотика бесполезным в любой концентрации.
Существуют также плазмиды с более расслабленным происхождением.
Есть два способа использования хлорамфеникола для амплификации плазмиды.
1. Используйте хлорамфеникол в соответствии с «Маниатисом»
Это рецепт из классической поваренной книги протокола Маниатиса и др. он же «Маниатис». 1
Маниатис рекомендует выращивать культуру до насыщения, затем добавить 170 мкг / мл хлорамфеникола и продолжить выращивание культуры в течение следующих 16 часов.Вы полностью остановите синтез белка в и без того плотной культуре. Клетки перестанут расти, но вектор будет увеличиваться.
2. Используйте хлорамфеникол по Бегби
(Нет, вы не должны знать Бегби, так как это еще не нарицательное имя).
Бегби и др. исследовали другую, более быструю возможность. 2 Согласно предыдущему протоколу выращивание культуры займет не менее 36 часов.
Альтернативой является добавление хлорамфеникола в гораздо более низкой концентрации, 3 мкг / мл, при инокуляции основной культуры стартовой.Суб-ингибирующая концентрация немного замедлит время удвоения вашего E.coli , но не остановит его. Однако это увеличит количество копий вашего вектора в несколько раз.
Независимо от того, каким образом вы усиливаете свой вектор с помощью хлорамфеникола, относитесь к полученной культуре как содержащей вектор с высоким числом копий. Прежде всего, не перегружайте колонку midiprep или maxiprep лизатом — используйте минимальный объем культуры в соответствии с протоколом. Элюируйте максимальным объемом буфера и повторите элюцию.Вы всегда можете сконцентрировать ДНК позже.
Есть ли у вас другие советы и рекомендации по использованию антибиотиков для увеличения выхода плазмид? Пожалуйста, поделитесь этим с сообществом в комментариях ниже.
Список литературы
- Маниатис Т., Фрич Э. Ф. и Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование . Нью-Йорк: Лаборатория Колд-Спринг-Харбор; 1982. pp 545. [назад]
- Begbie S. et al. (2005) Влияние субингибиторных уровней хлорамфеникола на количество копий плазмиды pBR322 в Escherichia coli DH5 ?. Журнал экспериментальной микробиологии и иммунологии (JEMI). 7: 82-8. [назад]
Вам это помогло? Тогда поделитесь, пожалуйста, со своей сетью.
Подготовка СМИ — Лаборатория Грегори С. Гилберта
Стандартные рецепты приготовления сред
Агар с солодовым экстрактом + хлорамфеникол
Для общей изоляции грибов (стандартная среда для выделения грибов из листьев)
20 г солодового экстракта
15 г агара
0.200 г хлорамфеникола
1 л деионизированной воды
Смешайте и нагрейте до растворения всех ингредиентов. Хлорамфеникол можно автоклавировать.
Автоклав, охладите и залейте.
10% триптиказо-соевый агар + циклогексимид
Для общей изоляции бактерий (стандартная среда для выделения бактерий из растений)
3 г триптиказо-соевого бульона
15 г агара 1 л деионизированной воды
Смешайте и нагрейте до растворения всех ингредиентов.
Автоклав и охладить до температуры заливки на водяной бане.
Перед заливкой добавьте: Циклогексимид (200 мг / л) в виде 10 мл 1 г / 50 мл исходного раствора 90% EtOH.
Агар с солодовым экстрактом + бенлат + хлорамфеникол
Для изоляции грибов базидиомицетов гниения древесины
20 г солодового экстракта
15 г агара
0,200 г хлорамфеникола
1 л деионизированной воды
Смешайте и нагрейте до растворения всех ингредиентов.
Автоклав и охладить до температуры заливки на водяной бане.
После автоклавирования, непосредственно перед заливкой добавьте: Benlate (10 мг / л) в виде 1 мл исходной суспензии 10 мг / мл
(исходная суспензия: 0.200 г Бенлата в 20 мл основного раствора 70% EtOH)
V8 Juice Agar
Часто используется для усиления споруляции грибов и оомицетов
1 банка (163 мл) V8 Juice
1,8 г CaCO
315 г Агар
довести до 905 мл деионизированной водой (742 мл di h30)
Mix и нагрейте, чтобы все ингредиенты растворились.
Автоклав, охладите и залейте.
Среда PARP
Для селективного выделения видов Phytophthora и Pythium.
https: // wiki.bugwood.org/PARP
Пимарицин чувствителен к свету — готовьте и храните носитель при слабом освещении. Он действует, чтобы подавить настоящие грибки.
PCNB — фунгицид широкого спектра действия. Это довольно токсично и, возможно, канцерогенно.
Ампициллин и Рифампицин — антибактериальные препараты широкого спектра действия.
Избегайте контакта с кожей и защищайте глаза от ДМСО.
Оригинальное цитирование: Jeffers and Martin 1986 Plant Disease 70: 1038-1043
PEG-опосредованная, стабильная, ядерная и хлоропластная трансформация Cyanidioschizon merolae
Bio Protoc.2019 сен 5; 9 (17): e3355.
Максимилиан Зенкевич
Биологический факультет Варшавского университета, Miecznikowa 1, 02-096, Варшава, Польша
Tomasz Krupnik
Биологический факультет Варшавского университета, Miecznikowa 1, 02-096, Варшава, Польша
Anna DrożakБиологический факультет Варшавского университета, Miecznikowa 1, 02-096, Варшава, Польша
Kinga Kania
Биологический факультет Варшавского университета, Miecznikowa 1, 02-096, Варшава, Польша
Факультет Биология, Варшавский университет, Miecznikowa 1, 02-096, Варшава, Польша
Поступила в редакцию 22 марта 2019 г .; Пересмотрено 22 августа 2019 г .; Принята в печать 22 августа 2019 г.
Авторские права © 2019 Авторы; эксклюзивный лицензиат Bio-protocol LLC. Эту статью цитировали в других статьях в PMC.Аннотация
Возможность достичь ядерной трансформации или трансформации хлоропластов у растений была давней целью, особенно в исследованиях микроводорослей. За последние годы успехов было мало, но временная и стабильная ядерная трансформация была достигнута у многих видов. Наш недавно разработанный метод позволяет относительно просто трансформировать Cyanidioschizon merolae как в ядерном, так и в хлоропластном геноме посредством гомологичной рекомбинации между геномом и вектором трансформации.Использование гена устойчивости к хлорамфениколу в качестве селектируемого маркера позволяет проводить эффективный отбор мутантных колоний на чашках. В целом метод позволяет получать мутантные штаммы в течение 6 месяцев.
Ключевые слова: Cyanidioschizon merolae, трансформация хлоропластов, ядерная трансформация, селекция хлорамфениколом, мутантный отбор, доставка вектора, опосредованного ПЭГ
Предпосылки
Cyanidioschizon merolae 10D — это небольшие одноклеточные эукариотические красные водоросли, обитающие в кислых горячих источниках.Недавно были секвенированы все три его генома: ядро ( Мацузаки и др. , 2004 г. ), митохондрии ( Ohta et al. , 1998 г. ) и пластида ( Ohta et al. , 2003 г. ). Его простая клеточная анатомия, наличие одного митохондрии и хлоропласта, сильно редуцированная сплайсосома ( Старк и др. , 2015 ), почти лишенный интронов, ядерный геном, делает этот организм подходящим кандидатом в качестве модельного организма в широком диапазоне исследований растений, от анатомии клеток и пластид, через физиологию и до генной инженерии ( Kuroiwa et al., 1998 г. ; Nozaki et al. , 2003 г. ). Его простота делает его особенно полезным для генетических манипуляций. Таким образом, многие генетические методы были применены и оптимизированы для этого организма, включая антисмысловую супрессию, временную экспрессию, нарушение гена и стабильную вставку в ядерный геном (Newell, 2000; Уокер и др. , 2005 г. ; Хальманн, 2007; Minoda и др. , 2004 г. ; Ohnuma et al. , 2008 г. ; Имамура и др. , 2009 г .; Ohnuma et al., 2009 г. ; Имамура и др. , 2010 г. ; Watanabe et al. , 2011 г. , Zienkiewicz et al. , 2017a ). Недавно также была достигнута стабильная трансформация генома хлоропласта ( Zienkiewicz et al. , 2017b ; Zienkiewicz et al. , 2018 ) в нашей лаборатории. Разработанный метод использует преимущества рекомбинации двойных гомологов в C. merolae , что позволяет интегрировать чужеродную ДНК в геном в определенных областях. Нокаутная мутация гена заменяет или разрушает интересующий ген cat (хлорамфениколацетилтрансфераза; Zienkiewicz et al., 2017a ) ген под исходным промотором или любым знакомым ядерным или хлоропластным промотором ( Крупник и др. , 2018 ). Промоторы, управляющие транскрипцией гена cat , должны проявлять конститутивную активность от умеренной до значительной; поэтому рекомендуется применение уже протестированных промоторов ( Крупник и др. , 2018 ). Путем введения токсина Diphtheria (фрагмент A-DTA) под конститутивным промотором в вектор трансформации нам удалось практически исключить возможность случайных, незаконных событий рекомбинации ( Zienkiewicz et al., 2018 ). Единичное событие рекомбинации, случайная интеграция или иное неспецифическое включение вектора трансформации в ядерный геном, вероятно, вызовет экспрессию белка A-DTA и, по сути, приведет к лизису клеток. Однако гетерогенность трансформации хлоропластов все еще остается проблемой. Мы показали, что продолжающийся рост мутантов хлоропластов при увеличении концентрации хлорамфеникола позволяет в принципе снизить гетерогенность и отобрать гомогенные мутанты.Хлорамфеникол — единственный антибиотик, токсичный для C. merolae (из примерно 10 протестированных, Zienkiewicz et al. , 2017a ). Этот метод так же прост, как применение липофектамина для доставки ДНК, и столь же эффективен, как метод генной пушки, но без его недостатков и сложности ( Zienkiewicz et al. , 2017b ).
Материалы и реагенты
Шприцевые фильтры (0,45 мкм, стерильные, PTFE, VWR, Германия, номер по каталогу: 514-0073)
1.Микропробирки 5 мл (GenoPlast, Польша, GP30623B / 80-1500)
Стеклянные колбы Эрленмейера 250 мл (Simax, Германия)
Центрифужные пробирки 50 мл Тип FALCON (GenoPlast, Польша, GP440PSK)
Petit
посуда (диаметр 12 см)
Parafilm
Клеточная культура штамма C. merolae , 10D (NIES-3377 Unialgal, Clonal and axenic или NIES-1332, Unialgal, Clonal и Non-axenic) была получена из коллекции микробных культур (mcc.nies.go.jp, Цукуба, Япония) и использовался на протяжении всего исследования.
Примечание. Клетки выращивали в жидкой среде MA2 (Minoda et al., 2004) в стеклянном сосуде при постоянном белом свете (фотон 50 мкмоль м -2 с -1 ; измерено с помощью датчика PAR / Temp Quantitherm) при 42 ° C или на чашках Петри, наполненных средой MA2, отвержденных добавлением 1% (мас. / Об.) Агара (Blirt, Польша).
Вектор трансформации
Конструирование вектора трансформации полностью зависит от метода интеграции ДНК или общей конструкции предполагаемого эксперимента.Например, ген можно нокаутировать с помощью двойной гомологичной рекомбинации. Для этой цели вектор трансформации должен состоять из двух гомологичных боковых сторон длиной 500-1000 п.н., как на 3 ’, так и на 5’ концах последовательности интересующего гена. Оба фланга должны быть связаны с последовательностью селектируемого маркерного гена (кошачья-хлорамфениколацетилтрансфераза) под конститутивным промотором , например. , (P apc ) ( Zienkiewicz et al. , 2018 ).
Агар (LE Standard Blirt, Польша, каталожный номер: AG41)
PEG (полиэтиленгликоль, Fluka, Германия, каталожный номер: BCBC0873)
(NH 4 ) 2 SO 4 (Чемпур, Польша, CAS: 7783-20-2, WE: 231-984-1)
MgSO 4 · 7H 2 O (Чемпур, Польша)
KH 2 PO 4 (Chempur, Польша, CAS: 7778-77-0, WE: 231-913-4)
CaCl 2 · 2H 2 O (Chempur, Польша CAS: 10035-04-8, WE: 233-140-8)
ЭДТА · 2Na (Карл Рот, Германия, CAS: 6381-92-6, EG-Nr.205-358-3)
FeCl 3 · 6H 2 O (Chempur, Польша, CAS: 10025-77-1, WE: 231-729-4)
H 3 BO 3 (Chempur, Польша, CAS: 10043-35-3, WE: 233-139-2)
MnCl 2 · 4H 2 O (Chempur, Польша, CAS: 13446-34-9, WE: 231-869-6)
ZnCl 2 Chempur (Польша, CAS: 7646-85-7, WE: 231-592-0)
Na 2 MoO 4 · 2H 2 O (Чемпур, Польша, CAS: 10102-40-6, WE: 231-551-7)
CoCl 2 · 6H 2 O (Chempur, Польша CAS: 7791-13-1, WE: 231-589-4)
CuCl 2 · 2H 2 O (Chempur, Польша CAS: 10125-13-0, WE: 231-210-2)
PEG 4000 (Fluka, Германия, CAS: 25322-68-3)
Хлорамфеникол (BioShop, Канада, CAS: 56-75-7, Lot No.: 8E55095)
Хлорамфеникол (см. Рецепты)
MA-1 (см. Рецепты)
MA2 (среда Аллена) и 10x MA2 ( Minoda и др. , 2004 г. см. рецепты)
Планшеты с отвержденным агаром (см. Рецепты)
Раствор A2 Fe-EDTA (см. Рецепты)
Базовый раствор микроэлементов A2 (см. Рецепты)
ПЭГ 60% (см. Рецепты)
Оборудование
Центрифуги с регулируемой температурой ( e.грамм. , центрифуга Eppendorf, Германия, модели: 5810 R и 5415 R)
Спектрофотометр (, например, , Шимадзу, Япония, модель: UV-1800)
NanoDrop (, например, , NanoDrop Lite, Thermo, США)
Датчик PAR / Temp Quantitherm (Hanzatech, Великобритания)
Камера для выращивания / инкубатор (устойчивые условия 42 ° C и 50 мкмоль м -2 с -1 света)
Орбитальный шейкер
Процедура
С.merolae стандартные условия роста
Стандартная питательная среда — среда MA2 Allen (рецепт 2). Мы предлагаем приготовить 10-кратный концентрированный основной раствор MA2 с микроэлементами A2 без A2 Fe-EDTA и автоклавировать. Для каждого нового приготовления питательной среды разбавляйте соответствующий объем. После автоклавирования добавьте A2 Fe-EDTA (рецепт 4).
Культуры следует выращивать в прозрачном стерильном сосуде объемом не менее чем в пять раз больше, чем культура клеток ( e.грамм. , 50 мл культур в колбах 250 мл).
Культуры необходимо осторожно перемешивать (30-50 об / мин на орбитальном шейкере).
Культуры должны быть стерильными, поэтому любой культуральный сосуд должен быть закрыт, но он должен обеспечивать газообмен. Атмосферного CO 2 достаточно для роста, но можно применять до 5% CO 2 в воздухе.
Интенсивность света должна находиться в диапазоне от 50 до 100 мкмоль фотонов при непрерывном освещении -2 с -1 .
Скорость роста аналогична в диапазоне температур 37-42 ° C.
OD C. merolae не должна превышать 0,01–1. Мы советуем обновлять каждую культуру еженедельно или раз в две недели путем инокуляции свежей культурой из 1/100 объема старой культуры.
Трансформация ПЭГ клеток C. merolae
Создайте как минимум (работайте в дубликатах) 2x 50 мл культуры OD 750 = 0.1 за неделю до трансформации и дать ему вырасти в стандартных условиях до OD 750 = 0,4.
За два дня до трансформации введите фотопериод 8/16 ч. Свет / темнота.
За час до трансформации поместите в стандартные условия освещения (если период темноты не завершился).
Вращение 100 мл культуры при 40 ° C и 2000 × g в течение 5 мин.
Ресуспендируйте осадок в 50 мл раствора MA-1 при 40 ° C и снова замедлите вращение при 40 ° C и 2000 × g в течение 5 мин.
Ресуспендируйте осадок в 0,5 мл раствора MA-1 при 40 ° C (теперь готов к трансформации).
Произведите большое количество (более 50 мкг и высокую концентрацию (более 200 нг / мкл, точное измерение на NanoDrop) вектора трансформации.
Разбавьте вектор трансформации до 20 мкг в общей сложности 400 мкл буфера МА-1.
Добавьте 100 мкл клеточной суспензии к 400 мкл ДНК и осторожно перемешайте, пипетируя ее вверх и вниз 2-3 раза.
Добавьте 500 мкл 60% стерильного ПЭГ и осторожно перемешайте его наконечником (конечная концентрация ПЭГ должна быть 30%).
Инкубируйте 5 мин при комнатной температуре.
Перенести суспензию клеток в 50 мл MA2 и замедлить темп при 40 ° C и 2000 × g в течение 5 мин, повторить еще раз.
Ресуспендируйте в 50 мл среды MA2 и примените стандартные условия роста.
Разрешить выращивание при постоянном освещении в течение 3 дней, после чего ввести выбранные условия — хлорамфеникол в концентрации 150 мкг / мл в форме свежеприготовленного маточного раствора 100 мг / мл.
Культура должна бледнеть (медленно становиться желто-белой), а затем возобновлять рост (появление зеленого цвета).
Через 2–3 недели перенесите 500 мкл культуры в 50 мл среды MA2 в колбе на 250 мл.
Планшет 50 мкл культуры на 1% (мас. / Об.) Чашках Петри MA2, отвержденных агаром, 3 раза закройте парафильмом, чтобы избежать чрезмерного испарения и высыхания матрицы среды.
Разрешить выращивание в стандартных условиях до появления колоний.
Отобрать 20-50 колоний и перенести в колбу на 250 мл с 50 мл МА2, содержащего 100 мкг / мл хлорамфеникола.
После того, как OD 750 = 0,4, внесите в среду MA2 250, 200 и 250 мкг / мл хлорамфеникола соответственно.
Дайте ему вырасти в течение ~ 2 недель до OD 750 ~ 0,5.
Засейте новые культуры из успешной выживающей культуры, выращенной с наивысшей концентрацией хлорамфеникола.
Повторяйте столько, сколько необходимо для достижения и подтверждения гомогенности соответствующими генетическими методами (, например, , с помощью кПЦР, специфичной для WT и модифицированных геномов, Саузерн-блотт. Время, необходимое для всей процедуры, может варьироваться и обычно занимает около 6 месяцев).
Анализ данных
Из-за 2-3-недельного периода селективного роста с последующим посевом клеток на твердую среду невозможно оценить эффективность трансформации.Однако в наших более ранних попытках ( Zienkiewicz et al. , 2017a ) мы получили жизнеспособные колонии в 10 из 11 попыток. Введенная мутация снабжала клетку геном устойчивости, не нарушая при этом ни одного нативного гена. При введении любой мутации функционального гена следует ожидать более низкой эффективности в зависимости от интересующего гена. Гомогенность может быть достигнута путем многократного пассирования культур при ступенчатом увеличении (как правило, увеличения концентрации хлорамфеникола на 50 мкг / мл для каждого пассажа) концентрации селектируемого маркера.Из-за наличия множественных копий генома хлоропластов труднее получить гомогенные мутанты хлоропластов. По нашему опыту, это занимает от 3 до 6 месяцев дольше и требует более высоких концентраций хлорамфеникола. Более того, присутствие WT и модифицированных множественных копий геномов хлоропластов может привести к оптимальной гетерогенности, когда клетка должна поддерживать обе версии, чтобы выдержать специфическую максимальную концентрацию хлорамфеникола. Чем важнее интересующий ген, тем больше вероятность его появления.
Рецепты
МА-1 (100 мл) (Таблица 1)
Таблица 1.
Компоненты буфера МА-1
Реагент Количество на 100 мл 9175 20 мМ (NH 4 ) 2 SO 4 0,26 г 2 мМ MgSO 4 · 7H 2 O 50 мг Раствор микроэлементов 0,2 мл MA2 (среда Аллена) (Таблица 2)
Таблица 2.
Компоненты буфера MA-2
Планшеты, затвердевшие на агаре (Таблица 3)Реагент MA2 10x MA2 (NH 4 ) 2 SO 4 262 мг 2,62 г KH 2 PO 4 54 мг 540 мг MgSO 4 · 7H 2 O 50 мг 500 мг CaCl 2 · 2H 2 O 14 мг 140 мг Базовый раствор микроэлементов A2 0.2 мл 2 мл A2 Раствор Fe-EDTA 0,4 мл 4 мл Дистиллированная вода Долить до 100 мл Долить до 100 мл 579
Таблица 3.
Компоненты чашек, затвердевших на агаровой смеси
Реагент Количество на 100 мл Агар в воде 1 г 10x Allen Medium 10 мл Fe-EDTA, запас 0.4 мл Стерильная вода до 100 мл Раствор Fe-EDTA A2 (Таблица 4)
Таблица 4.
Компоненты раствора Fe-EDTA A2
90 Реагент Количество на 100 мл ЭДТА · 2Na 700 мг FeCl 3 · 6H 2 O 400 мг Дистиллированная вода до 100 мл Базовый раствор микроэлементов A2 (Таблица 5)
Таблица 5.
Компоненты основного раствора микроэлементов A2
Реагент Количество на 100 мл H 3 BO 3 285 мг MnCl 2 · 4H 2 O 180 мг ZnCl 2 10,5 мг Na 2 MoO 4 · 2H 2 O 39 мг CoCl 2 · 6H 2 O 4 мг CuCl 2 · 2H 2 O 4.3 мг Дистиллированная вода До 100 мл ПЭГ 60% (мас. / Об.) (Таблица 6)
Таблица 6.
ПЭГ 60% компонент
Реагент Количество на 100 мл ПЭГ 60 г Дистиллированная стерильная вода До 100 мл исходный раствор хлорампа / 100 мг 7)
Таблица 7.
Компоненты основного раствора хлорамфеникола (100 мг / мл)
Реагент Количество на 1 мл Хлорамфеникол 96 мг 1292151 мл
Благодарности
Этот протокол был адаптирован из Zienkiewicz et al. (2017a и 2017b). Работа поддержана грантом Opus 5 (DEC-2013/09 / B / NZ1 / 00187), присужденным Польским национальным научным центром M.Z.
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены.
Ссылки
1. Хальманн А. (2007). Трансгеника водорослей и биотехнология. Трансгенное растение J 1 (1): 81-98. [Google Scholar] 2. Имамура С., Терашита М., Охнума М., Маруяма С., Минода А., Вебер А.П., Иноуэ Т., Секин Ю., Фудзита И., Омата Т. и Танака К. (2010). Гены ассимиляции нитратов и их регуляция транскрипции в одноклеточной красной водоросли Cyanidioschyzon merolae : генетические доказательства восстановления нитрита с помощью фермента, подобного сульфитредуктазе.Физиология растительных клеток 51 (5): 707-717. [PubMed] [Google Scholar] 3. Крупник Т., Василевска В., Дрожак А., Романовска Е. и Зенкевич М. (2018). Применение промоторов хлоропластов Cyanidioschyzon merolae для экспрессии экзогенного белка. Водоросли 33 (4): 351-358. [Google Scholar] 4. Куроива Т., Куроива Х., Сакаи А., Такахаши Х., Тода К. и Ито Р. (1998). Аппарат деления пластид и митохондрий. Int Rev Cytol 181: 1-41. [PubMed] [Google Scholar] 5. Мацузаки М., Мисуми О., Shin IT, Maruyama S., Takahara M., Miyagishima SY, Mori T., Nishida K., Yagisawa F., Nishida K., Yoshida Y., Nishimura Y., Nakao S., Kobayashi T., Momoyama Y. , Хигасияма Т., Минода А., Сано М., Номото Х., Оиси К., Хаяси Х., Охта Ф., Нисизака С., Хага С., Миура С., Моришита Т., Кабея Ю., Терасава К., Судзуки Ю., Исии Ю., Асакава С., Такано Х., Охта Н., Куроива Х., Танака К., Симидзу Н., Сугано С., Сато Н., Нодзаки Х., Огасавара Н. , Кохара Ю. и Куроива Т. (2004). Последовательность генома сверхмалой одноклеточной красной водоросли Cyanidioschyzon merolae 10D.Природа 428 (6983): 653-657. [PubMed] [Google Scholar] 6. Минода А., Сакагами Р., Ягисава Ф., Куроива Т. и Танака К. (2004). Улучшение условий культивирования и доказательства ядерной трансформации путем гомологичной рекомбинации в красной водоросли, Cyanidioschyzon merolae 10D. Физиология растительной клетки 45 (6): 667-671. [PubMed] [Google Scholar] 7. Ньюэлл К. А. (2000). Технология трансформации растений. Разработки и приложения. Мол Биотехнол 16 (1): 53-65. [PubMed] [Google Scholar] 8. Нодзаки Х., Мацудзаки М., Такахара М., Мисуми О., Куроива Х., Хасегава М., Шин-и Т., Кохара Ю., Огасавара Н. и Куроива Т. (2003). Филогенетическое положение красных водорослей выявлено множественными ядерными генами митохондрий-содержащих эукариот и альтернативной гипотезой о происхождении пластид. Дж Мол Эвол 56 (4): 485-497. [PubMed] [Google Scholar] 9. Охнума М., Мисуми О., Фудзивара Т., Ватанабе С., Танака К. и Куроива Т. (2009). Временное подавление гена у красной водоросли, Cyanidioschyzon merolae 10D.Протоплазма 236 (1-4): 107-112. [PubMed] [Google Scholar] 10. Охнума М., Йокояма Т., Иноуэ Т., Секин Ю. и Танака К. (2008). Опосредованная полиэтиленгликолем (ПЭГ) временная экспрессия гена в красной водоросли, Cyanidioschyzon merolae 10D. Физиология растительной клетки 49 (1): 117-120. [PubMed] [Google Scholar] 11. Охта Н., Мацузаки М., Мисуми О., Миягишима С. Ю., Нозаки Х., Танака К., Шин И. Т., Кохара Ю. и Куроива Т. (2003). Полная последовательность и анализ пластидного генома одноклеточной красной водоросли Cyanidioschyzon merolae.ДНК Res 10 (2): 67-77. [PubMed] [Google Scholar] 12. Охта Н., Сато Н. и Куроива Т. (1998). Структура и организация митохондриального генома одноклеточной красной водоросли Cyanidioschyzon merolae , выведенная из полной нуклеотидной последовательности. Нуклеиновые кислоты Res 26 (22): 5190-5198. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Старк М. Р., Данн Э. А., Данн В. С., Грисдейл К. Дж., Даниэле А. Р., Холстед М. Р., Фаст Н. М. и Рейдер С. Д. (2015). Резко уменьшенная сплайсосома в Cyanidioschyzon merolae.Proc Natl Acad Sci U S A 112 (11): E1191-1200. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 14. Уокер Т. Л., Коллет С. и Пёртон С. (2005). Трансгенные водоросли в эпоху генома. Дж. Психол 41 (6): 1077-1093. [Google Scholar] 15. Ватанабэ С., Охнума М., Сато Дж., Йошикава Х. и Танака К. (2011). Полезность репортерной системы GFP в красных водорослях Cyanidioschyzon merolae. J Gen Appl Microbiol 57 (1): 69-72. [PubMed] [Google Scholar] 16. Зенкевич М., Крупник Т., Дрозак А., Голке А. и Романовска Э.(2017). Хлорамфениколацетилтрансфераза — новый селективный маркер стабильной ядерной трансформации красной водоросли Cyanidioschyzon merolae. Протоплазма 254 (1): 587-596. [PubMed] [Google Scholar] 17. Зенкевич М., Крупник Т., Дрозак А., Голке А. и Романовска Э. (2017). Трансформация генома хлоропластов Cyanidioschyzon merolae : перспективы понимания функции хлоропластов в экстремальных условиях. Завод Мол Биол 93 (1-2): 171-183. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.Зенкевич М., Крупник Т., Дрозак А., Василевска В., Голке А. и Романовска Е. (2018). Делеция гена psbQ ‘в Cyanidioschyzon merolae раскрывает функцию внешнего PsbQ’ в PSII. Завод Мол Биол 96 (1-2): 135-149. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]Картофельный агар с декстрозой (КПК) — принцип, применение, процедура и характеристики
Картофельный агар с декстрозой (КПК)используется для культивирования грибов. Картофельный агар с декстрозой (КПК) — это среда общего назначения для дрожжей и плесени, в которую можно добавлять кислоты или антибиотики для подавления роста бактерий.Рекомендуется для методов подсчета на тарелках для пищевых продуктов, молочных продуктов и косметических средств для тестирования. КПК можно использовать для выращивания клинически значимых дрожжей и плесени. Богатая питательными веществами основа (картофельный настой) способствует спороношению плесени и образованию пигментов у некоторых дерматофитов.
Принцип картофельного агара с декстрозой (КПК)
Картофельный агар с декстрозой состоит из обезвоженного картофельного настоя и декстрозы, которые способствуют обильному росту грибков. Агар добавлен в качестве отвердителя.Во многих стандартных процедурах используется определенное количество стерильной винной кислоты (10%), чтобы снизить pH этой среды до 3,5 +/- 0,1, подавляя рост бактерий. Хлорамфеникол действует как селективный агент для подавления избыточного бактериального роста конкурирующих микроорганизмов из смешанных образцов, позволяя при этом селективную изоляцию грибов.
Примечание. Не нагревайте подкисленную среду повторно, нагревание в кислотном состоянии приведет к гидролизу агара.
Использование картофельного агара с декстрозой (КПК)
- Картофельный агар с декстрозой используется для обнаружения дрожжей и плесени в молочных продуктах и полуфабрикатах.
- Может также использоваться для выращивания дрожжей и плесневых грибов из клинических образцов.
- Картофельный агар с декстрозой и винной кислотой рекомендуется для микробиологического исследования пищевых и молочных продуктов.
- Картофельный агар с декстрозой и хлортетрациклином рекомендуется для микробного подсчета дрожжей и плесени в косметике.
- Картофельный агар с декстрозой и хлорамфениколом рекомендуется для селективного культивирования грибов из смешанных образцов.
Состав картофельного агара с декстрозой (КПК)
Приготовление себя
| Картофельный настой | 200 г |
| Декстроза | 20 г |
| 9183 | |
| Agar | 1 литр |
Примечание: 200 г картофельного настоя эквивалентны 4.0 г картофельного экстракта.
Приготовление из коммерческого среднего порошка
| Коммерческий порошок КПК (20 г декстрозы, 15 г агара и 4 г картофельного крахмала) | 39 г |
| Дистиллированная вода | 1 литрПроцедура с картофельно-декстрозным агаром (КПК)Подготовка к работе
Приготовление из коммерческого среднего порошка
Кроме того, картофельный агар с декстрозой с хлортетрациклином содержит: Кроме того, агар с картофельной декстрозой с хлорамфениколом содержит: Конечный pH 5,6 +/- 0,2 при 25 ° C Кроме того, агар с картофельной декстрозой с TA содержит: Конечный pH 3,5 +/- 0,3 при 25 ° C Характеристики колоний на картофельном агаре с декстрозой (КПК)После достаточной инкубации изолированные колонии должны быть видны в областях с штрихами и сплошной рост в областях с высокой интенсивностью. прививка. Aspergillus flavus : Порошкообразные массы желто-зеленых спор на верхней поверхности и красновато-золотистых на нижней поверхности. Penicillium chrysogenum : Оливково-зеленый со стерильным белым краем на верхней поверхности и от оранжевого до красного, морщинистый на нижней поверхности. Мои домашние рецепты и советы @EnjoyYourCooking28 января 2019 г. в Hot Soups, Soups by Julia VolhinaРецепт супа, быстрого приготовления также требует ограниченного количества ингредиентов , но это довольно вкусно. Это довольно сытно, со всем мясом и яйцами, а также с подогревом, и я думаю, что это идеальный зимний обед . А также отличный выбор, когда у вас мало времени. Простое начало нового года. Теги: морковь, укроп, яйцо, чеснок, мясо, лук, корень петрушки, суп29 декабря 2018 в Основные блюда, Без мяса, Салаты, Стороны от Юлии Волхиной Все любители свеклы там (сколько бы вас ни было) этот рецепт для вас: вареная свекла со сладкими апельсинами, приправленная пряным имбирем, красным винным уксусом и свежевыжатым апельсиновым соком. Я делаю это из жареной свеклы (оберните вымытую свеклу фольгой, положите ее в кастрюлю и поставьте в духовку, нагретую до 355F, примерно на 1,5 часа или более или менее, в зависимости от их размера). Вареные тоже подойдут (при необходимости см. Инструкцию по варке свеклы). Я никогда не пробовала этот салат с предварительно приготовленной свеклой. Размер, вкус (и сладость) как свеклы, так и апельсина составляет , что может сильно отличаться от , поэтому существует множество вариантов «по вкусу».Вы не хотите, чтобы сладость была подавляющей (здесь на помощь приходят уксус и соль, также помогут кислые апельсины). Также люди имеют переменную «толерантность» к вкусу имбиря: начните с малого и добавьте еще по вкусу. Просто проявите изобретательность, вы не будете разочарованы. Теги: свекла, имбирь, без мяса, апельсин, салат, овощи24 ноября 2018 г. в Яйца, основные блюда от Юлии Волхиной Один из этих рецептов «все, что есть в холодильнике» здесь: в в данном случае требуется цветная капуста, помидоры, яйца и немного зелени . Я люблю цветную капусту, жареную цветную капусту больше всего, а сочетание цветной капусты с яйцами — одно из моих любимых. Приготовление цветной капусты на сковороде займет некоторое время. Для ускорения закройте крышку. Я бы посоветовал не варить или готовить цветную капусту на пару для этого рецепта, так как она станет слишком водянистой и потеряет хруст. Теги: завтрак, цветная капуста, яйцо, обед, помидор3 ноября 2018 г. в Говядине, Основные блюда, Свинина Юлия Волхина Не такой сложный рецепт котлет , на приготовление уйдет примерно час и будет производить довольно много еды после. Эти фрикадельки имеют прекрасный вкус прямо из духовки или разогреты позже. Хорошо сочетается с картофельным пюре, макаронами или крупами (например, с вареной гречкой). Самый хитрый трюк — не поджечь соус во время приготовления, просто убедитесь, что температура приготовления достаточно низкая для легкого кипения и время от времени помешивайте кастрюлю с толстыми стенками или глубокую чугунную сковороду. Теги: говядина, ужин, фарш, обед, мясо, молоко, свинина, романтический, соус20 октября 2018 г. в Горячие супы, Супы от Юлии Волиной С тыквой и кабачком наступает сезон для овощных супов с использованием указанных овощей. Сегодняшний рецепт состоит из мускатной тыквы и некоторых других прекрасных овощей, которые могут сопровождать его. Он полон вегетарианских полезных свойств , имеет намек на специи (которые вы можете немного приручить, если ищете что-то менее острое, уменьшив количество перца) и совершенно отличный вкус. Если вы фанат сезона, то суп из мускатной тыквы — , безусловно, блюдо стоит попробовать. Теги: яблоко, морковь, сливки, лук, суп, суп-пюре, кабачки, овощи6 октября 2018 г. в Советы, советы и инструкции Юлии Волхиной С сезона тыкв и кабачков снова на нас, для тех из вас, кто хотел приготовить и съесть некоторые из них, но не решался пойти на это из-за страха «очистить» и приготовить тыкву, вот простой метод из нескольких шагов, который я использую, который позволяет мне сделайте это быстро и, что более важно, безболезненно и бескровно. |